甲醇刚果红染色

（1）实验原理

刚果红是一种分子为长线状况的偶氮染料，它以胺基和淀粉样物质的羟基结合，平行的附着在淀粉样物质的纤维上而显红色，将其染成红色复合物，对纤维二糖和葡萄糖无作用，可用此来鉴别纤维素或纤维素分解菌的分解作用。

（2）实验方法

Step1：石蜡切片常规操作脱蜡水化；

Step2：甲醇刚果红染色液染10-20min；

Step3：用碱性乙醇分化液分化数秒，自来水冲洗5min；

Step4：苏木素复染2min，自来水冲洗10min；

Step5：脱水：依次经85%、95%Ⅰ、95%Ⅱ各10秒、无水乙醇Ⅰ30s、无水乙醇Ⅱ1min；

Step6：透明：经二甲苯Ⅰ1min、二甲苯Ⅱ2min；

Step7：中性树胶固封，镜检。

（3）案例展示

（4）常见问题

1）、染色时间过长或过短导致的染色过深或过浅；

2）、碱性乙醇分化不足，导致组织染色阳性过浅；

3）、植物组织较脆，易出现掉片；

4）、淀粉与弹力纤维都着染刚果红颜色，二者在形态上有所不同，应注意区别；

5）、用碱性酒精分化时要掌握恰当，若分化不足，胶原纤维也可着色，分化过度时淀粉样蛋白也可脱色；

6）、淀粉样物质未染色的蜡片，再存放一年后，将逐渐减弱与归于刚果红结合的能力。

（5）注意事项

1）、控制染色时间，保证染色不至于过深或过浅，必要时可在显微镜下观察控制染色时间；

2）、分化时间不易过长，保证阳性显色清晰可见；

3）、减少掉片风险。

（6）送检与交付标准