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甲醇刚果红染色

(1)实验原理

刚果红是一种分子为长线状况的偶氮染料,它以胺基和淀粉样物质的羟基结合,平行的附着在淀粉样物质的纤维上而显红色,将其染成红色复合物,对纤维二糖和葡萄糖无作用,可用此来鉴别纤维素或纤维素分解菌的分解作用。

(2)实验方法

Step1:石蜡切片常规操作脱蜡水化;

Step2:甲醇刚果红染色液染10-20min;

Step3:用碱性乙醇分化液分化数秒,自来水冲洗5min;

Step4:苏木素复染2min,自来水冲洗10min;

Step5:脱水:依次经85%、95%Ⅰ、95%Ⅱ各10秒、无水乙醇Ⅰ30s、无水乙醇Ⅱ1min;

Step6:透明:经二甲苯Ⅰ1min、二甲苯Ⅱ2min;

Step7:中性树胶固封,镜检。

(3)案例展示

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(4)常见问题

1)、染色时间过长或过短导致的染色过深或过浅;

2)、碱性乙醇分化不足,导致组织染色阳性过浅;

3)、植物组织较脆,易出现掉片;

4)、淀粉与弹力纤维都着染刚果红颜色,二者在形态上有所不同,应注意区别;

5)、用碱性酒精分化时要掌握恰当,若分化不足,胶原纤维也可着色,分化过度时淀粉样蛋白也可脱色;

6)、淀粉样物质未染色的蜡片,再存放一年后,将逐渐减弱与归于刚果红结合的能力。

(5)注意事项

1)、控制染色时间,保证染色不至于过深或过浅,必要时可在显微镜下观察控制染色时间;

2)、分化时间不易过长,保证阳性显色清晰可见;

3)、减少掉片风险。

(6)送检与交付标准

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