细胞侵袭

（1）实验介绍

肿瘤细胞通过膜表面特定受体与基质或基底膜的层粘连蛋白、纤维连接蛋白和IV型胶原等相粘连，然后肿瘤细胞可释放蛋白水解酶或激活基质中已存在的酶原，使基质成分降解，最后肿瘤细胞运动而充填到被水解了的基质的空隙处，如此三个过程不断重复肿瘤细胞不断向深层侵袭。

（2）应用简介

肿瘤细胞通过膜表面特定受体与基质或基底膜的层粘连蛋白、纤维连接蛋白和IV型胶原等相粘连，然后肿瘤细胞可释放蛋白水解酶或激活基质中已存在的酶原，使基质成分降解，最后肿瘤细胞运动而充填到被水解了的基质的空隙处，如此三个过程不断重复肿瘤细胞不断向深层侵袭。

（3）技术原理

本实验采用的Matrigel是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原等。将Matrigel铺在Transwell侵袭小室的多孔滤膜上，能形成与天然基底膜极为相似的基底膜结构。具有侵袭能力的细胞在趋化剂诱导下可穿过多孔滤膜，侵袭细胞经染色后，在显微镜下观察和计数。

（4）实验方法

Step1：制备条件培养基

Step2：包被基底膜

Step3：水化基底膜

Step4：接种细胞

Step5：培养细胞

Step6：固定及染色

Step7：镜检

（5）案例展示

（6）技术总结

1）24孔板下室一般加入600ul的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡， 要将小空提起，去除气泡，再将小室放进培养板；

2）接种的细胞应选择处于对数生长期且状态良好，细胞计数需准确；

3）待细胞迁出，且形态展开后即可固定染色；

4）染色后，可用棉签轻轻擦掉上层未迁出细胞；

5）拍照时，同一视野不可重复拍照，膜上小孔清晰，细胞形态明显，所有照片的背景需统一。

（7）送检与交付标准