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染色质免疫共沉淀ChIP

(1)技术原理

先用甲醛交联细胞内“蛋白-DNA”复合物,并用超声波破碎DNA至适合的长度。细胞裂解后,孵育结合了抗体的珠子,诱饵蛋白通过其抗体便结合到了Beads上,同时和诱饵蛋白互作的DNA,也一起沉淀到Beads上。洗涤掉未结合的DNA后,再用洗脱液将DNA-蛋白复合物从Beads洗脱下来,便得到染色质免疫共沉淀产物。DNA-蛋白复合物去交联后,既可qPCR检测已知DNA片段,也可用二代测序与蛋白互作的DNA片段。

当没有合适的诱饵蛋白抗体时,可以通过表达融合了flag标签的诱饵蛋白,利用flag标签做免疫沉淀。即细胞过表达Flag-Bait,经裂解后与anti-Flag珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,与诱饵融合蛋白互作的DNA“共沉淀”到Beads上,再经洗涤、洗脱后做qPCR或NGS测序。

(2)染色质免疫沉淀ChIP服务优势

1近十年服务经验,服务案例众多,客户发文Nature Cell Biology等高质量期刊;

2可对围绕DNA结合蛋白开展的整体课题提供全方位方案建议;

3自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行最优的实验路线;

4售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿。

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