慢病毒包装

（1）简介

慢病毒载体（Lentivirus vector）是以慢病毒基因组为基础，由所需的目的基因取代部分基因构建而成。目前使用的慢病毒载体多采用H I V-1基因组改造而来。与一般的逆转录病毒载体相比，慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力而具有更广的宿主范围。慢病毒载体还可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而实现持久表达。在感染能力方面可以有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，又很少引发机体免疫反应，能达到良好的基因治疗效果，具有广阔的应用前景。

（2）原理

l                      将携带目的基因/shRNA的慢病毒载体和包装质粒共转染病毒包装细胞，在该细胞中进行包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，浓缩可获得高滴度病毒。

l                      慢病毒感染宿主细胞能力强，可作为基因过表达和基因干扰首选。

（3）实验

l                      载体的构建：设计引物与合成，钓取目的基因；设计与合成shRNA，构建含有目的基因或shRNA的重组质粒；

l                      共转染细胞：使用高效重组载体和病毒包装质粒共转染293T 细胞；

l                      病毒的收获及浓缩：收集细胞上清液，过滤，将病毒浓缩。

l                      测定病毒滴度：获得高滴度的病毒液。

l                      构建稳定细胞株：用病毒液感染目的细胞，抗生素筛选，建立单克隆细胞株。

（4）病毒包装流程

（5）稳定细胞株的建立流程：

（6）慢病毒载体系统：

慢病毒载体系统：该病毒包装系统包含3个质粒，组成为pCDH, psPAX2, pMD2.G，其中后两个是病毒包装质粒。

上图为pCDH表达质粒图谱

上图为psPAX2包装质粒图谱 上图为pMD2.G包装质粒图谱

慢病毒质粒在293T细胞中的表达图

上图绿色荧光明显

慢病毒质粒在目的细胞中的表达效果图