单细胞测序

（1）简介

单细胞测序技术（single cell sequencing）是指在单个细胞水平上，对基因组、转录组、表观组进行高通量测序分析的一项新技术，它能够弥补传统高通量测序的局限性，揭示单个细胞的基因结构和基因表达状态，反映细胞间的异质性。单细胞转录组测序技术广泛地应用于肿瘤、发育生物学、微生物学、神经科学、以及植物学等领域，具有广阔的应用前景。云序生物拥有最受行业认可的BD Rhapsody™单细胞测序平台。

（2）技术原理
BD Rhapsody™卡式芯片中有20W+的微孔，该数量级远大于样品细胞数量以确保一个微孔中只有单个细胞捕获。单细胞捕获过程中一个细胞与一个beads依次落入同一微孔，细胞裂解后释放mRNA与beads上的引物序列结合，进而使mRNA逆转录为cDNA，回收beads后抓取cDNA进行文库构建、测序和分析。

（3）技术优势
1）可实时监测细胞捕获效率和多细胞比例
2）一次性获得细胞数高达2万个的高通量单细胞测序数据
3）多细胞比例低至 0.47%/1000 个细胞
4）可同时检测表面蛋白、基因表达信息
5）细胞表面蛋白与基因表达联合分析可对细胞亚群精细分类

（4）样品要求
细胞数目：>1-2x105个；
细胞活率：>80%；
细胞直径：<30μm；
细胞悬液：细胞悬液中应避免存在细胞成团、细胞碎片或其它杂质等现象。同时避免溶液中残留核酸、EDTA、Dnase I等可能影响后续实验的物种。

（5）数据展示
1）数据质控

2）去除批次效应

3）特异marker基因分析

4）细胞亚群注释

5）热图