RACE技术服务

（1）实验介绍

RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。本公司可对有polyA尾和5’帽子结构的真核生物mRNA进行相应的RACE分析。进行RACE实验需至少有200bp以上的已知序列。

3’RACE原理：用带有特殊接头的逆转录引物对总RNA进行逆转录，根据逆转录引物上的接头序列和mRNA已知序列设计引物即可扩增出3’末端序列。

5’RACE原理：将5’末端的帽子结构去掉后，mRNA5’末端即暴露出磷酸基团。用T4 RNA连接酶在mRNA5’末端连接特异性接头。反转录后，根据接头序列和mRNA已知序列设计引物对反转录产物扩增，即可扩增出mRNA5’末端的序列。

cDNA末端快速扩增技术 (rapid amplification of cDNA ends, RACE)，是运用PCR技术，在仅知目标基因部分序列片段的基础上，从转录本中快速扩增其cDNA的5’和3’末端的有效方法。主要应用于全长基因获取、转录起始位点的位置、转录调控区域、miRNA/lncRNA靶标验证。

（2）服务流程：

3‘RACE实验

根据已知序列设计带接头的逆转录引物及巢式PCR引物

高质量RNA提取

用带接头的逆转录对mRNA进行逆转录

槽式PCR扩增3’末端序列，并电泳检测

将PCR产物送测序公司测序或连接T载体后测序

5‘RACE实验

根据已知序列设计巢式PCR引物

高质量RNA提取

去磷酸化处理

“去帽子”反应

5’RACE Adaptor的连接

逆转录反应

巢式PCR扩增5’末端序列

将PCR产物送测序公司测序或连接T载体后测序

（3）样本要求

1）需提供新鲜组织或活细胞样本。如果提供RNA样本，需要高质量无降解RNA片段。

2）组织或RNA样本需干冰或液氮运输。细胞样本常温运输。

3）需提供至少200bp已知序列，且已知序列需与mRNA序列一致，不能是与mRNA互补序列，否则RACE实验可能无法完成。

（4）其他

关键因素：RACE实验成功的关键在于高质量与完整性好的RNA以及特异性强的引物，我们有专业的技术员能够完成以上的任务。

交付结果：扩增全长片段测序报告；扩增的全长片段的电泳图；含全长片段的质粒及菌液。

交付时间：大约15-25个工作日