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茜素红染色
(1)实验原理
1)成骨诱导的过程是使钙离子能够以钙盐的方式沉淀下来,即“钙结节”,鉴定钙结节的染色方法常用茜素红染色法。
2)茜素红:茜素磺酸钠,茜素s,茜素红s,茜素胭脂红,1,2-二羟基葱醒-3-磺酸钠,1,2-二羟基葱醒-3-磺酸钠盐。橙黄色或黄棕色粉末。易溶于水,微溶于乙醇,不溶于苯。
1%水溶液pH为2.15,其水溶液呈前黄褐色,加盐酸后变为黄色,加氢氧化钠后则变成蓝紫色。有刺激性。能与许多金属离子生成有色化合物,能与错、钍、铝、钛及钙发生显色反应。
3)染色原理:茜素红与钙发生显色反应,产生一种深红色的带色化合物,这样成骨诱导的细胞外面沉积的钙结节也就被染成了深红色。
(2)实验试剂及仪器
1)试剂:PBS10醛缓冲液0.1%茜素红-Tris-HCL染液蒸馏水
2)仪器:倒置显微镜
(3)实验步骤
1)弃培养液,PBS冲洗2次
2)10%甲醛缓冲液固定10min
3)蒸馏水冲洗3次
4)加入0.1%茜素红-Tris-HCL染液(pH8.3),37℃下染色30min
5)蒸馏水冲洗
6)在倒置显微镜下观察有无茜素红染色阳性细胞
(4)其他
主要用途:应用茜素红的复合物,可用于鉴定干细胞是否已成功向成骨细胞转化
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