细胞衰老

（1）实验介绍

衰老细胞中细胞器数量尤其是线粒体数量减少，胞质内有色素堆积和空泡形成，最终导致细胞死亡。总体来说衰老细胞的各种结构呈退行性变化。根据其特征，目前常用β-半乳糖苷酶活性检测衰老。

（2）应用简介

衰老细胞的形态变化主要表现为形状变大、变平、胞核增大、核膜内陷、染色质固缩、胞内溶酶体变多等。衰老细胞中细胞器数量尤其是线粒体数量减少，胞质内有色素堆积和空泡形成，最终导致细胞死亡。总体来说衰老细胞的各种结构呈退行性变化。根据其特征，目前常用β-半乳糖苷酶活性检测衰老。

（3）技术原理

衰老细胞或组织产生的β-半乳糖苷酶可以催化底物X—Gal，生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下很容易观察到。在人体表皮角质层细胞中，也可以发现SA-β-gal随年龄的增加而增加。并且，SA-β-gal不依赖于DNA复制，可以区分衰老细胞与静止期的细胞。

（4）实验方法

Step1：细胞培养

Step2：细胞转染或药物处理

Step3：处理结束后进行细胞β-半乳糖苷酶检测

Step4：200x镜下观察

经过处理后，细胞衰老程度显著增加。

（5）技术总结

细胞在体外培养时，会随着传代次数的增加，衰老情况随之增加，表现为衰老细胞增多或细胞更容易衰老。因此，在细胞传至20代左右时，可取一部分细胞进行β-半乳糖苷酶染色分析，发现阳性结果即诱导成功。如染色不理想，则可增加外部因素处理，如不同浓度的双氧水，处理时间可自己选择，但不宜过长。外部因素处理后，可从中选取部分细胞进行染色分析。或者，在细胞铺板培养过程中，提高细胞的接种密度，同时使用无血清的培养基进行培养，一样选择部分细胞进行染色分析。以上操作可交替进行。直至出现染色阳性结果。

（6）送检与交付标准