蛋白质免疫印迹（Western Blot)

1）实验介绍

蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即western blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

实验的关键是如何正确的抽提获得实验所需目的蛋白，我们会根据不同目的蛋白、组织类型、蛋白类型制定出抽提方案来获得高质量、含量足够的目的蛋白的蛋白裂解液。

免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(western blot)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测样品中蛋白的方法,并能对蛋白进行定性和半定量分析。

（2）服务流程

1）接收样本以及抗体，实验室可以有偿提供常备抗体。

2）根据样本类型、目的蛋白表达确定蛋白抽提方案，预实验确定样本中蛋白表达以及抗体效价。

3）正式实验。

4）5-10个工作日内完成，根据检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少相应变化。

5）出具实验报告（详细实验流程以及数据分析），提供原始扫描图片。

（3）样本要求

可以接收样本有：客户自己提取蛋白样本、细胞样本、组织样本、其他，样本来源为人和大小鼠。

1、客户提供已经提取样本

1）、蛋白保存完好：蛋白提取后保存于-80℃或者液氮。

2）、提取过程中加入合适蛋白酶抑制剂。

3）、蛋白采用BCA法测浓度后，浓度范围应该为2-8ug/ul或者更高。

4）、经预实验检测合格后才可进行正式实验。

2、客户提供细胞样本

1）、细胞状态良好， 保证运输到实验室的细胞为活细胞。

2）、每个实验组细胞数量保证大于106以上，根据检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少细胞要求数量会相应变化。

3、客户提供组织样本

1）、组织保存完好：保存于-80℃或者液氮。

2）、组织重量要求大于100mg，根据组织大小、检测指标难易、蛋白表达丰度不同以及检测指标数量多少组织要求数量会相应变化。

3）、组织中血液残留少，应该剔除除目的组织以外的部分。

4、其他

1）、对于需要分离细胞组分蛋白，根据情况制定不同提取方案。

2）、特殊样本：血清、细胞培养上清、非实验室常规来源样本（狗、猪、猴等）等，根据具体情况制定不同实验方案。

（4）服务项目

总蛋白/细胞膜/浆/核/特定细胞器蛋白抽提、蛋白定量、Western Blot检测

（5）其他

质量控制：制定蛋白质抽提方案、严格的预实验摸索优化实验条件，确保实验的可靠性。

交付结果：数据分析、实验报告、原始数据及图片、剩余样本等

质量保证：客观、公正、可信的实验结果

交付时间：大约10-15个工作日（根据预实验、样本数量情况决定）